Hướng dẫn sử dụng Bộ ELISA Human Collagenase II (Collagenase II)

Hướng dẫn sử dụng bộ kit ELISA collagenase II ( Collagenase II )

Thuốc thử này chỉ dành cho mục đích nghiên cứu. Mẫu: huyết thanh hoặc huyết tương

Cung cấp sinh phẩm Fanke

Mục đích: Bộ dụng cụ xác định hàm lượng collagenase II (Collagenase II) trong huyết thanh người , huyết tương và các dịch sinh học khác .

Nguyên tắc kiểm tra:

Bộ Collagenase II là xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme pha rắn (ELISA). Các chất chuẩn có nồng độ Collagenase II đã biết và các mẫu có nồng độ chưa biết được thêm vào đĩa vi thể để phát hiện. Collagenase II và kháng thể biotatin hóa được ủ lần đầu tiên. Sau khi rửa, HRP có nhãn avidin được thêm vào. Sau khi ủ và rửa, liên hợp enzyme không liên kết được loại bỏ, sau đó cơ chất A, B và liên hợp enzyme được thêm vào đồng thời. Sản xuất màu sắc. Độ sâu màu tỷ lệ thuận với nồng độ Collagenase II trong mẫu.

Bộ collagenase II , hướng dẫn bộ kit elisa, bộ ELISA, bộ ELISA, hướng dẫn bộ kit elisa người

Nội dung bộ tài liệu và sự chuẩn bị của nó

Vật liệu khép kín

1. Nước cất.

2. Bộ lấy mẫu: 5ul, 10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 500ul, 1000ul.

3. Máy tạo dao động và máy khuấy từ, v.v.

sự an toàn

1. Tránh tiếp xúc trực tiếp với dung dịch dừng và chất nền A, B. Sau khi tiếp xúc với các chất lỏng này, hãy rửa sạch bằng nước càng sớm càng tốt.

2. Không ăn, uống, hút thuốc hoặc sử dụng mỹ phẩm trong quá trình thí nghiệm.

3. Không dùng miệng để lấy bất kỳ nguyên liệu nào trong bộ sản phẩm.

Phòng ngừa hoạt động

1. Thuốc thử phải được bảo quản theo hướng dẫn trên nhãn và đưa về nhiệt độ phòng trước khi sử dụng. Các chất chuẩn sau khi pha loãng phải được loại bỏ và không thể bảo quản được.

2. Những thanh gỗ không được sử dụng trong thí nghiệm phải được cho ngay vào túi và niêm phong lại để tránh hư hỏng.

3. Các thuốc thử khác không được sử dụng phải được đóng gói hoặc đậy kín. Không trộn lẫn thuốc thử của các lô khác nhau. Sử dụng trước khi bảo hành.

4. Sử dụng đầu tip dùng một lần để tránh lây nhiễm chéo. Tránh sử dụng pipet có bộ phận kim loại khi hút dung dịch dừng và chất nền A và B.

5. Sử dụng hộp nhựa sạch để định cấu hình dung dịch rửa. Trộn kỹ tất cả các thành phần và mẫu trong bộ sản phẩm trước khi sử dụng.

6. Rửa tấm enzym phải vỗ khô hoàn toàn, không cho giấy thấm trực tiếp vào giếng phản ứng chuẩn enzym để hút nước.

7. Chất nền A phải được làm bay hơi để tránh mở nắp trong thời gian dài. Chất nền B nhạy cảm với ánh sáng và tránh tiếp xúc lâu với ánh sáng. Tránh tiếp xúc với tay và độc hại. Giá trị OD phải được đọc ngay sau khi thử nghiệm hoàn tất.

8. Thứ tự thêm thuốc thử phải nhất quán để đảm bảo tất cả các giếng đều được ủ trong cùng một thời gian.

9. Việc ủ được thực hiện theo thời gian ghi trong hướng dẫn, lượng bổ sung và thứ tự.

Phương pháp thu thập, xử lý và bảo quản mẫu

1. Huyết thanh ---- Tránh bất kỳ kích ứng tế bào nào trong quá trình thực hiện. Sử dụng các ống không có chất gây sốt và nội độc tố. Sau khi lấy máu, huyết thanh và hồng cầu được phân tách nhanh chóng và cẩn thận bằng cách ly tâm ở tốc độ 1000 xg trong 10 phút.

2, huyết tương ----- EDTA, citrate, huyết tương heparin có thể được sử dụng để thử nghiệm. Các viên được loại bỏ bằng cách ly tâm ở tốc độ 1000 xg trong 30 phút.

3. Chất nổi trên bề mặt tế bào - 1000 xg được ly tâm trong 10 phút để loại bỏ các hạt và polyme.

4, mô đồng nhất ----- mô được thêm vào lượng nước muối sinh lý thích hợp. Ly tâm ở tốc độ 1000 × g trong 10 phút, lấy phần nổi phía trên

5. Bảo quản ------ Nếu mẫu không được sử dụng ngay thì nên chia mẫu thành nhiều phần nhỏ - 70 °C để tránh đông lạnh nhiều lần. Không sử dụng tán huyết hoặc tăng lipid máu càng nhiều càng tốt. Nếu có lượng lớn hạt trong huyết thanh, hãy ly tâm hoặc lọc trước khi xét nghiệm. Không rã đông ở nhiệt độ 37°C hoặc cao hơn. Nó phải được rã đông ở nhiệt độ phòng và đảm bảo rằng mẫu được rã đông hoàn toàn đồng đều.

[ Bộ ELISA Collagenase II ( ELISAn ) ] Chuẩn bị thuốc thử

1. Tiêu chuẩn: Độ pha loãng nối tiếp của tiêu chuẩn phải được chuẩn bị trong quá trình thí nghiệm và không thể lưu trữ. Trộn các dung dịch chuẩn trước khi pha loãng. Tỷ lệ pha loãng như sau:

2. Pha loãng dung dịch đệm rửa (50 x): pha loãng 50 lần nước cất.

bước

1. Trộn kỹ tất cả thuốc thử trước khi sử dụng. Không để chất lỏng tạo ra một lượng lớn bọt, để tránh tạo thêm một lượng lớn bọt khí trong quá trình nạp, dẫn đến sai sót khi nạp.

2. Số lượng thanh cần thiết được xác định bằng số lượng mẫu thử cộng với số lượng chuẩn. Nên sử dụng nhiều lỗ cho mỗi lỗ tiêu chuẩn và lỗ trống. Mỗi mẫu được xác định theo số lượng riêng và có thể sử dụng lỗ kép nhiều nhất có thể để tạo lỗ kép. Mẫu thử được pha loãng theo tỷ lệ 1:1 với dung dịch pha loãng mẫu thử và thêm 50 ul vào giếng phản ứng.

3. 50 ul chất chuẩn đã pha loãng được thêm vào giếng phản ứng và 50 ul mẫu cần kiểm tra được thêm vào giếng phản ứng. Ngay lập tức thêm 50ul kháng thể đánh dấu biotin. Đậy màng, trộn nhẹ bằng cách lắc và ủ trong 1 giờ ở 37°C.

4. Loại bỏ chất lỏng khỏi giếng, đổ đầy dung dịch rửa vào từng giếng, lắc trong 30 giây, loại bỏ dung dịch rửa và lau khô bằng giấy thấm. Lặp lại thao tác này 3 lần. Nếu giặt bằng máy giặt, số lần giặt sẽ tăng lên một lần.

5. 80 ul ái lực streptavidin-HRP được thêm vào từng giếng, lắc nhẹ hỗn hợp này và ủ ở 37°C trong 30 phút.

6. Loại bỏ chất lỏng khỏi giếng, đổ đầy dung dịch rửa vào từng giếng, lắc trong 30 giây, loại bỏ dung dịch rửa và lau khô bằng giấy thấm. Lặp lại thao tác này 3 lần. Nếu giặt bằng máy giặt, số lần giặt sẽ tăng lên một lần.

7. Thêm 50 μl mỗi chất nền A và B vào từng giếng, trộn nhẹ bằng cách lắc và ủ ở 37°C trong 10 phút. Tránh chiếu sáng.

8. Lấy khay vi thể ra và nhanh chóng thêm 50 ul dung dịch dừng. Ngay sau khi thêm dung dịch dừng, cần xác định kết quả.

9. Giá trị OD của mỗi giếng được đo ở bước sóng 450 nm.

Giao thức thử nghiệm được đề xuất

Giới hạn

Các kết quả trên tiêu chuẩn số 6 là phi tuyến tính và không thể thu được kết quả chính xác từ đường cong tiêu chuẩn này.

Bộ kit thực hiện ELISA collagenase II (Collagenase II)

1. Độ nhạy: Nồng độ phát hiện tối thiểu nhỏ hơn tiêu chuẩn số 1. Độ tuyến tính của độ pha loãng. Hệ số hồi quy tuyến tính của mẫu và giá trị hệ số tương quan nồng độ R mong đợi là 0,990.

2. Tính đặc hiệu: Không phản ứng với các cytokine khác.

3. Độ lặp lại: Hệ số biến thiên giữa tấm và tấm nhỏ hơn 10%.

Phân tích kết quả phân tích

1. Giá trị thiết bị: đọc giá trị OD của từng lỗ trên đầu đọc vi bản có bước sóng 450 nm.

2. Giá trị OD độ hấp thụ là tọa độ (Y) và nồng độ tiêu chuẩn Collagenase II tương ứng là abscissa (X) và thu được đường cong tương ứng. Hàm lượng Collagenase II của mẫu có thể được chuyển đổi từ đường chuẩn theo giá trị OD. sự tập trung.

3. Phạm vi phát hiện: 0-80ng/ml

4. Độ nhạy: 0,1 ng/ml

Công nghệ sinh học Fanke Thượng Hải chuyên sản xuất và cung cấp các bộ dụng cụ: ELISA chống sandwich kép, bộ ELISA, bộ ELISA người, bộ phát hiện liên kết enzyme, thuốc thử nhập khẩu trong nước, bộ elisa, bộ ELISA, bộ ELISA chuột, bộ ELISA chuột, bộ yếu tố liên quan đến apoptosis, bộ ELISA interleukin, bộ ELISA VIP và các sản phẩm phòng thí nghiệm khác, chất lượng sản phẩm, đảm bảo chất lượng.

Hiệu suất của bộ:

Độ nhạy 1: nồng độ phát hiện tối thiểu nhỏ hơn 1 tiêu chuẩn. LiCollagenase II Độ pha loãng. Mẫu hồi quy liCollagenase IIar và hệ số tương quan nồng độ dự kiến ​​R có giá trị là 0,990.

2: không có phản ứng đặc hiệu với các cytokiCollagenase II khác.

3 repeaCollagenase IIility: tấm, tấm giữa các hệ số biến thiên đều nhỏ hơn 10%.

Các bước của bộ ELISA peptide vòng procollagen loại III ở người:

1 trước khi sử dụng, tất cả thuốc thử và trộn. Không để chất lỏng tạo ra số lượng lớn bong bóng, để tránh thêm số lượng lớn bong bóng, dẫn đến sai số bổ sung.

Mỗi mẫu và lỗ lỗ được khuyến khích làm lỗ. Mỗi mẫu có thể được làm theo số lượng riêng và có thể được sử dụng làm lỗ trên lỗ.

3 pha loãng sau 50ul tiêu chuẩn trong lỗ phản ứng, thêm vào mẫu 50 UL trong lỗ phản ứng cần đo. Ngay lập tức joiCollagenase IId biotin kháng thể 50 UL. Đậy tấm màng Collagenase II, lắc dao động nhẹ nhàng, 37 độ C trong 45 phút.

4 lỗ bên trái chứa chất lỏng, mỗi lỗ chứa đầy nước giặt, dao động 30 giây để nước giặt thoát ra, thấm khô bằng giấy thấm. Lặp lại thao tác này 4 lần. Nếu giặt bằng machierCollagenase II cùng với giặt, thời gian giặt tăng lên một lần.

5 mỗi lỗ thêm enzyme ái lực chuỗi -HRP 100ul, trộn dao động nhẹ, ủ 37 độ 30 phút.

6 lỗ bên trái chứa chất lỏng, mỗi lỗ chứa đầy nước giặt, dao động 30 giây để nước giặt thoát ra, thấm khô bằng giấy thấm. Lặp lại thao tác này 4 lần. Nếu giặt bằng machierCollagenase II cùng với giặt, thời gian giặt tăng lên một lần.

7 mỗi lỗ thêm chất nền A, B 50ul, trộn dao động nhẹ, ủ 37 độ 5 phút. Tránh ánh sáng.

8 Lấy đĩa ELISA ra, thêm nhanh 50ul chất lỏng đã kết thúc, thêm dung dịch dừng ngay sau khi có kết quả xác định.

Xác định 9 od mỗi lỗ ở bước sóng 450nm.

Kết quả nhận định và phân tích:

1, giá trị thiết bị: ELISA 450nm Yu Bo đọc lỗ trên thiết bị

2, đối với giá trị OD dưới dạng tọa độ dọc (y), nồng độ chuẩn ot tương ứng là tọa độ ngang (x), có đường cong tương ứng, hàm lượng mẫu ot có thể theo giá trị OD bằng cách chuyển đổi đường cong tiêu chuẩn ra nồng độ tương ứng, nhân với bội số pha loãng; hoặc với nồng độ chuẩn và giá trị OD tính theo phương trình hồi quy của đường chuẩn thì giá trị OD của mẫu trong phương trình tính nồng độ mẫu nhân với hệ số pha loãng là nồng độ thực tế của mẫu.

3, phạm vi phát hiện: 0-100ng/ml

4, độ nhạy: 0,39ng/ml