Công nghệ tiêu hóa mô bằng enzyme - từ collagenase thô đến các sản phẩm tiêu hóa có độ tinh khiết cao
Collagenase, thường được sử dụng trong quá trình tiêu hóa mô bằng enzym, đặc biệt làm suy giảm collagen ngoại bào, phân tách mạng lưới collagen và fibronectin mà không làm tổn hại đến tính toàn vẹn của cấu trúc bề mặt tế bào. Do thành phần phức tạp của ma trận ngoại bào, ngoài collagen, nó còn chứa các cấu trúc đại phân tử khác như Elastin và glycoprotein. Hơn nữa, các loại mô khác nhau, nguồn loài khác nhau và các nhóm tuổi khác nhau có các thành phần ma trận ngoại bào khác nhau. Do đó, sản phẩm collagenase thương mại nói chung là chiết xuất thô của Clostridium lysate lysate, một hỗn hợp các enzyme phân giải protein như collagenase và trypsin, có thể làm suy giảm collagen và các protein khác cũng như các chất đại phân tử ngoại bào như polysaccharides. Ứng dụng tiêu hóa trong nhiều loại mô.
Tuy nhiên, đối với các mô cụ thể được phân lập trong các nghiên cứu thực nghiệm khác nhau, cần phải lựa chọn sản phẩm collagenase phù hợp theo kinh nghiệm và khám phá nồng độ enzyme, khối lượng enzyme và thời gian hoạt động của enzyme để tìm ra phương án tiêu hóa tốt nhất.
Ví dụ lựa chọn sản phẩm Roche Collagenase
Sản phẩm Roche collagenase được chiết xuất từ Clostridium histolyticum và được phân loại thành Collagenase A/B/D/P/H tùy theo hoạt tính enzyme khác nhau và ứng dụng chức năng đã được xác minh. Nó được sử dụng rộng rãi trong việc tách các tế bào đơn lẻ trong các mô khác nhau như phổi, tim, cơ, xương, mô mỡ, gan, thận, sụn, vú, nhau thai, mạch máu, mô não và mô khối u. Hiệu suất tế bào, hoạt tính và chức năng tế bào thu được từ ứng dụng phải được kiểm soát và xác minh chất lượng sản phẩm một cách nghiêm ngặt.
Phân loại Roche Collagenase | Thành phần enzyme chính | Ứng dụng tổ chức được đề xuất (dựa trên tài liệu tham khảo sản phẩm trong tài liệu) |
Collagenase A | Collagenase loại I, collagenase loại II, clostripain, trypsin, protease trung tính Tỷ lệ pha trộn enzyme thông thường, hoạt tính enzyme vừa phải | tế bào trứng Tế bào phổi |
Collagenase B | Collagenase loại I, collagenase loại II, clostripain, trypsin, protease trung tính Hoạt tính collagenase từ trung bình đến cao, hoạt tính protein Clostridium cao hơn (>10U/mg) | Tế bào cơ tim Tế bào sụn Tế bào tiền thân phôi |
Collagenase D | Collagenase loại I, collagenase loại II, clostripain, trypsin, protease trung tính Hoạt tính collagenase trung bình đến cao, hoạt tính trypsin rất thấp (<0,2U/mg) | Tế bào lympho Tế bào đuôi gai |
Collagenase P | Collagenase hoạt tính cao, Clostridin, trypsin, protease trung tính Sản phẩm được xác nhận để phân lập tế bào đảo | Tế bào đảo Tế bào sụn tế bào T |
Collagenase H | Collagenase loại I, collagenase loại II, clostripain, trypsin, protease trung tính Sản phẩm đã được xác minh để phân lập tế bào gan | Tế bào gan nguyên bào sợi mập |
Lời khuyên:
Nếu mô của bạn đang trong quá trình tiêu hóa và phân tán bằng enzyme, các tế bào bám dính dạng gelatin sẽ xuất hiện, điều này ảnh hưởng đến sự phân tán của tế bào. Có lẽ là do sự bám dính của DNA được giải phóng vào không gian ngoại bào trong các tế bào bị hỏng. Sự kết dính của các tế bào có thể đạt được bằng cách bổ sung DNase. Phân tán tốt hơn.
Bởi vì enzyme thô Collagenase cũng chứa nhiều loại protease khác nhau, chẳng hạn như amylase và lipase, nên nó cũng tiêu hóa protein trên bề mặt tế bào, gây ra những tổn thương nhất định cho tế bào. Ngoài ra, collagenase thô không duy trì được chất lượng và hoạt tính enzyme ổn định giữa các mẻ. Ngay cả khi bạn sử dụng các đợt collagenase khác nhau để tiêu hóa trong cùng một mô, bạn vẫn cần tối ưu hóa nồng độ enzyme, khối lượng enzyme và thời gian hoạt động của enzyme.
Vậy làm cách nào để tổ chức của bạn thực hiện thử nghiệm với ít nỗ lực hơn?
Sản phẩm của Roche Dispase ®
Roche Dispase ® có thể được sử dụng để chuẩn bị tế bào sơ cấp ở nhiều loại mô và cơ quan. Do tính chất nhẹ nên nó có thể gây tổn hại tối thiểu cho các tế bào trong quá trình tiêu hóa. Nó cũng có thể được sử dụng để nuôi cấy tế bào và huyền phù tế bào. Các chất kết tụ trong chất lỏng tiêu hóa và khử polyme. Dispase ® là một protease trung tính tinh khiết được chiết xuất từ Bacillus polymyxa giúp loại bỏ khả năng nhiễm mycoplasma và có độ ổn định tốt trong nhiều điều kiện pH và nhiệt độ nên đang trong quá trình tiêu hóa mô. Hiệu suất ổn định hơn collagenase.
Dispase ® Roche đặc biệt tách lớp biểu bì và vỏ não nuôi cấy tế bào da thu được trong một loạt các ứng dụng. Sự khác biệt giữa Dispase ® I và Dispase ® II là sự khác biệt về độ tinh khiết. Dispase ® I được khử trùng bằng bộ lọc và độ tinh khiết cũng như hoạt tính enzyme trên mỗi mg của Dispase ® I cao hơn nhiều so với Dispase ® II.
Roche Hỗn hợp enzyme cấp độ nghiên cứu có độ tinh khiết cao Liberase Hỗn hợp enzyme cấp độ nghiên cứu
Hỗn hợp enzyme cấp độ nghiên cứu Liberase chứa một loạt các hỗn hợp enzyme bao gồm hỗn hợp các tỷ lệ khác nhau của protease trung tính (protease không clostridium) và Collagenase I + Collagenase II có độ tinh khiết cao. Trong hầu hết các ứng dụng, Liberase thay thế collagenase truyền thống và tăng năng suất tế bào, khả năng sống của tế bào và chức năng tế bào.
Trong điều kiện lên men và tinh chế enzyme nghiêm ngặt, Hỗn hợp Enzyme Cấp Nghiên cứu Liberase loại bỏ các enzyme như Clostridin và trypsin, loại bỏ >98% nội độc tố và các thành phần tế bào chết khác khỏi nguyên liệu thô, do đó góp phần vào hoạt động của tổ chức. Trong quá trình tiêu hóa, khả năng sống của tế bào được tăng cường đáng kể. Dòng Liberase được khử trùng bằng bộ lọc và có độ đồng nhất cao theo từng mẻ, đảm bảo chất lượng phá mẫu và khả năng lặp lại trong suốt giai đoạn thử nghiệm.
Sản phẩm Liberase | Hàm lượng collagenase (mg/ống) | Hoạt tính collagenase (Wünschunits/ống) | Lượng protease trung tính | Protease trung tính tác động lên hoạt động của enzyme mô | Loại protease trung tính | nội độc tố (EU/mg) |
Giải phóng DL | 5mg 50mg | 26 260 | thấp | + | phân tán | 50 |
Liberase DH | 5mg 50mg | 26 260 | cao | +++ | phân tán | 50 |
Giải phóng TL | 5mg 50mg | 26 260 | thấp | ++ | Nhiệt phân | 50 |
Giải phóng TM | 5mg 50mg | 26 260 | trung bình | ++++ | Nhiệt phân | 50 |
Giải phóng TH | 5mg 50mg | 26 260 | cao | +++++ | Nhiệt phân | 50 |
So sánh sự thay thế của dòng sản phẩm Roche collagenase và Liberase
Roche Collagenase | đặc trưng | Wünschunits/mg | Các sản phẩm Liberase hoạt động tương ứng |
Collagenase A | Hỗn hợp enzym thô | 0,15 | Giải phóng TM |
Collagenase B | Hỗn hợp enzyme thô | 0,15 | Giải phóng TH |
Collagenase D | Hỗn hợp enzyme thô | 0,15 | Giải phóng TM |
Collagenase P | Hỗn hợp enzym thô | 1,50 | Liberase TL, Liberase DL |
Collagenase H | Hỗn hợp enzyme thô | 0,15 | Giải phóng TM |
Lời khuyên:
1. Các sản phẩm thuộc dòng Liberase được chia thành năm loại sản phẩm có hoạt động tiêu hóa khác nhau tùy theo tỷ lệ collagenase và protease trung tính khác nhau. Bạn có thể tham khảo các nghiên cứu trong phòng thí nghiệm khác hoặc tài liệu đã xuất bản để lựa chọn các sản phẩm phù hợp và tham khảo các quy trình vận hành.
Https://?id=col_030100
2. Đối với các nỗ lực tiêu hóa tế bào mô mới, bạn nên bắt đầu thử nghiệm với LiberaseTM, loại thuốc này có tính linh hoạt tốt cho nhiều loại mô.
3. Độ tinh khiết của Collagenase I + II trong Liberase rất cao và thời gian ủ bệnh thường giảm từ 10 – 30% so với các thí nghiệm tiêu hóa collagenase thông thường.
Xin lưu ý: Các sản phẩm Liberase Research Grade và các sản phẩm enzyme tiêu hóa khác chỉ dành cho nghiên cứu khoa học đời sống và nghiên cứu trong ống nghiệm. Không sử dụng sản phẩm này cho các thủ tục lâm sàng và chẩn đoán (ví dụ như cấy ghép đảo nhỏ ở người).
Để biết thêm thông tin về các sản phẩm Liberase, vui lòng nhấp vào để tải xuống hướng dẫn sử dụng.
Sichuan Yuanda Shuyang Pharmaceutical Co., Ltd.
