Bộ phát hiện định lượng Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) của chuột (ELISA)

Bộ phát hiện định lượng Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) của chuột (ELISA)

hướng dẫn sử dụng

[Tên bộ sản phẩm]

Bộ phát hiện định lượng Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) của chuột (ELISA)

[Sử dụng bộ sản phẩm]

Phát hiện định lượng hàm lượng Collagenase Ⅲ trong huyết thanh, huyết tương và các mẫu chất lỏng liên quan của chuột.

[Nguyên tắc phát hiện]

Bộ sản phẩm này sử dụng xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme bánh sandwich một bước kháng thể kép (ELISA). Thêm chất chuẩn, mẫu cần xét nghiệm và dung dịch làm việc có gắn nhãn enzyme vào tấm có nhãn enzyme trong suốt được phủ sẵn kháng thể Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) của chuột. Sau khi ủ đủ thời gian, rửa sạch để loại bỏ các thành phần không bám dính. Thêm chất phát triển A và B lần lượt, chất phát triển (TMB) được chuyển thành sản phẩm màu xanh lam được xúc tác bởi peroxidase cải ngựa (HRP) và chuyển sang màu vàng dưới tác dụng của axit. Nồng độ Collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) có mối tương quan thuận. Giá trị OD được đo ở bước sóng 450 nm. Dựa trên giá trị OD của chất chuẩn và mẫu, hàm lượng collagenase Ⅲ (Collagenase Ⅲ) của chuột trong mẫu đã được tính toán.

[Thành phần của bộ sản phẩm]

1

Tấm phủ enzyme

12 lỗ × 4 dải

7

Nhà phát triển A chất lỏng

3mL

2

Sản phẩm tiêu chuẩn: 48ng/mL

0,6mL

8

Chất lỏng phát triển B

3mL

3

Nước giặt đậm đặc gấp 20 lần

15mL

9

Dừng giải pháp

3mL

4

Pha loãng tiêu chuẩn

3mL

10

Hướng dẫn

1 phần ăn

5

chất pha loãng mẫu

3mL

11

Phim niêm phong

2 tờ

6

Thuốc thử enzym

5mL

12

túi kín

1

Lưu ý: Sản phẩm chuẩn được pha loãng với dung môi sản phẩm chuẩn theo thứ tự: 48, 24, 12, 6, 3, 1,5 ng/mL

[Thuốc thử và thiết bị cần thiết nhưng không được cung cấp]

1. Bộ điều nhiệt 37oC

2. Đầu đọc vi mạch thông số kỹ thuật tiêu chuẩn

3. Pipet chính xác và đầu tip dùng một lần

4. Nước cất

5. Ống nghiệm dùng một lần

6. Giấy thấm

[Các bước]

1. Chuẩn bị: Lấy bộ thuốc thử ra khỏi tủ lạnh và cân bằng lại ở nhiệt độ phòng trong 30 phút.

2. Dung dịch pha: pha loãng dung dịch rửa đậm đặc 20 lần với nước cất thành dung dịch ban đầu.

3. Thêm sản phẩm chuẩn và mẫu cần kiểm tra: lấy đủ số lượng tấm phủ enzym và cố định vào khung. Lập các giếng tiêu chuẩn, các giếng mẫu cần xét nghiệm và các giếng đối chứng trống, ghi lại vị trí của từng giếng trong các giếng tiêu chuẩn. Thêm 50μL chất chuẩn; thêm 10μL mẫu cần thử vào giếng mẫu, sau đó thêm 40μL chất pha loãng mẫu (nghĩa là mẫu được pha loãng 5 lần); thêm 100μL dung dịch làm việc có đánh dấu enzyme vào từng giếng; không có điều khiển trống tốt.

4. Ủ: Ủ trong bể nước 37°C hoặc máy điều nhiệt trong 60 phút.

5. Rửa tấm: loại bỏ chất lỏng, lau khô trên giấy thấm, đổ nước rửa vào từng giếng, để yên trong 1 phút, rũ bỏ nước rửa, vỗ khô trên giấy thấm, lặp lại quá trình rửa 5 lần theo cách này. Hướng dẫn rửa bảng).

6. Hiện màu: thêm 50 μL dung dịch hiện tượng A vào mỗi giếng, sau đó thêm 50 μL dung dịch hiện tượng B và hiện màu ở 37 ° C trong bóng tối trong 15 phút.

7. Chấm dứt: Tháo tấm dán nhãn enzyme và thêm 50μL dung dịch dừng vào từng giếng để dừng phản ứng (màu chuyển từ xanh sang vàng).

8. Xác định: Đặt các lỗ trắng về 0 và trong vòng 15 phút sau khi kết thúc, đo độ hấp thụ (giá trị OD) của mỗi giếng ở bước sóng 450 nm.

9. Tính toán: Theo nồng độ của sản phẩm chuẩn và giá trị OD tương ứng, tính phương trình hồi quy tuyến tính của đường chuẩn, sau đó tính nồng độ mẫu tương ứng trên phương trình hồi quy theo giá trị OD của mẫu. Bạn cũng có thể sử dụng nhiều phần mềm ứng dụng khác nhau để tính toán. Nồng độ cuối cùng là nồng độ đo được thực tế nhân với hệ số pha loãng.

[Yêu cầu mẫu]

1. Mẫu không thể chứa natri azide (NaN3) vì natri azide (NaN3) là chất ức chế peroxidase cải ngựa (HRP).

2. Mẫu vật phải được chiết càng sớm càng tốt sau khi thu thập. Việc chiết xuất phải được thực hiện theo tài liệu liên quan. Thí nghiệm nên được tiến hành càng sớm càng tốt sau khi chiết xuất. Nếu thử nghiệm không thể được thực hiện ngay lập tức, mẫu thử có thể được bảo quản ở -20oC, nhưng nên tránh đóng băng và tan băng nhiều lần.

3. Mẫu phải được ly tâm hoàn toàn, không có hiện tượng tan máu và các hạt.

【Các biện pháp phòng ngừa】

1. Thí nghiệm được thực hiện theo đúng hướng dẫn và kết quả của thí nghiệm phải được xác định bằng cách đọc trên máy đọc vi đĩa.

2. Nếu tấm phủ có dán nhãn enzyme không được sử dụng hết sau khi mở thì phải cho vào túi kín và bổ sung chất hút ẩm ngay lập tức.

3. Khuyến nghị rằng tất cả các tiêu chuẩn, mẫu và mẫu trắng phải được kiểm tra trùng lặp và lấy giá trị trung bình để giảm sai số thực nghiệm.

4. Nếu màu quá nhạt, thời gian ủ chất nền có thể được kéo dài hợp lý.

5. Để tránh lây nhiễm chéo, chất chuẩn, mẫu và mẫu trắng phải được thay thế bằng đầu tip cho mỗi mẫu bổ sung; các thành phần phổ biến như dung dịch làm việc enzyme, chất pha loãng mẫu và chất nền phải được thêm vào bằng đúc hẫng và không được chạm vào microwell; Không sử dụng lại màng niêm phong.

6. Các bộ dụng cụ được sử dụng trong thời gian bảo hành và không được trộn lẫn các lô thuốc thử khác nhau.

7. Chất nền B nhạy cảm với ánh sáng và tránh tiếp xúc lâu với ánh sáng.

[Tóm tắt quy trình vận hành]

Chuẩn bị thuốc thử, mẫu và chất chuẩn

Thêm các mẫu đã chuẩn bị, chất chuẩn và dung dịch làm việc chuẩn enzyme và phản ứng ở 37oC trong 60 phút

Rửa đĩa 5 lần, thêm dung dịch phát triển màu A và B và phát triển ở 37oC trong 15 phút

Thêm giải pháp dừng

Đọc giá trị OD trong vòng 15 phút

Tính toán

[Phạm vi kiểm tra]

1,5-48ng/mL

[đặc điểm kỹ thuật]

48 phần ăn/hộp

【Kho】

Bảo quản ở nhiệt độ 2-8oC, tránh ánh sáng và ẩm.

[Hiệu lực]

6 tháng